2018年12月13日在山东中医药大学图书馆B302召开2018年博士后出站、博士毕业答辩与开题。

  参会人员有：济南市中心医院苏国海教授，香港科技大学薛红教授，山东省医学影像研究所王光彬教授，山东中医药大学乔明琦教授、张惠云教授、鲁明源教授、魏凤琴教授、薛玲教授，以及山东中医药大学教师和研究生。

  由乔明琦教授致欢迎词：

  首先对参与答辩的各位专家表示欢迎和感谢。博士研究生毕业答辩，是博士生人生中至关重要的一个点。我有幸在瑞典参加过两次博士答辩，下载了他们的毕业论文，与国内比对发现目前国内研究生与国外仍有相当大的差距，国外对研究深度、系统的把握，实验的全面性做的很到位。希望各位教授能对今天答辩的三位，提出学术前沿的指导意见。让我们有请主席苏国海教授主持下面的答辩。

  苏国海教授：

  感谢乔院长的邀请，乔院长是我敬仰的国内大家，我们医院现在很多专家也在承担乔院长的部分课题。按照程序，今天的答辩正式开始，每人三十分钟。首先由王杰琼老师做博士后出站报告。

  肝疏泄失常病证机制——从雌激素介导的5-HT系统变化探讨PMDD肝气逆、郁两证的发病与疗效机制——王杰琼

  王杰琼：谢谢各位主席、专家的参加，我汇报的题目是：肝疏泄失常病证机制——从雌激素介导的5-HT系统变化探讨PMDD肝气逆、郁两证的发病与疗效机制。  

  经前情感障碍是经前期综合征的严重类型，是肝疏泄失常典型情志病症。乔明琦教授通过流行病学调查认为肝气逆、肝气郁为其主要亚型，并开发研制了相应的治疗药物白香丹胶囊和舒郁胶囊，获得新药证书。目前PMDD发病机制尚不明确，西医认为PMDD与雌激素及其受体介导的5-HT系统关系密切。所以本研究探讨雌激素及其受体介导5-HT能系统与PMDD肝气逆、郁两证的关系。

  实验内容主要有四个实验。

  实验一：雌激素诱导对RN16A-B14神经细胞5-HR2A、ERβ和TPH的影响。培养RN46A-B14细胞，雌激素干预B14细胞后在不同时间点进行5-HTR2A、ERβ和TPH免疫荧光检测、Western-blot检测、实时定量PCR检测、5-HT含量ELisa检测，结果显示：E2干预RN46A-B14细胞后，免疫检测显示干预48-72h后ERβ几乎100%阳性细胞，其中48h阳性细胞荧光最强，而5HTR2A出现了特异性染色但阳性率较低，TPH细胞阳性率均较低，72h荧光最强；Western-blot检测显示5-HTR2A,ERβ和TPH自E2干预24小时后蛋白表达量明显上升，72小时时已经开始明显降低；实时定量RT-PCR检测显示5-HT2A,ERβ和TPH在雌二醇处理48小时的时候，mRNA表达量达到最大值，且远远高于24小时，72h大幅度衰减;而ELisa检测结果显示，5-HT的表达量在干预后12小时已经较高，12-72h这段时间5-HT的含量趋于平稳。综上，E2干预RN46A-B14细胞后48h后细胞内5-HT2A,ERβ和TPH表达均有较高表达，5-HT的含量也趋于平稳，因此在后续的实验中我们可以选择在样本干预RN46A-B14细胞后48h收集细胞并进行检测。

  实验二：PMDD肝气逆证模型大鼠血清诱导对RN16A-B14神经细胞5-HR2A、ERβ和TPH的影响。选用雌性Wistar大鼠，通过阴道涂片镜检结合旷场行为学实验筛选出动情行为规律、状态活跃且旷场行为学得分相近的大鼠纳入本次试验，根据筛选结果，选取合适大鼠72只，随机均分为9组：正常对照组、PMS肝气逆模型组、氟西汀阳性对照组、模型+白香丹给药组（小、中、大剂量组）、正常+白香丹给药组（小、中、大剂量组））；各组大鼠模型评价成功后，阴道涂片镜检确定大鼠所处于的动情周期，本次实验各组大鼠予动情非接受期进行取材。结果：与正常组相比，PMDD肝气逆模型大鼠血清干预组E2表达量显著降低（P<0.05）；与模型组比较，氟西汀和白香丹各剂量模型给药组E2表达量未见显著性升高，但是均有升高趋势。空白给药各剂量组与正常组比较E2表达量没有明显变化，但具有升高E2表达量的趋势。与正常组相比，PMDD肝气逆证模型组大鼠血清干预组5-HTR2A和ERβ表达显著降低,TPH表达明显增强；空白白香丹给药组中，各剂量组5-HTR2A表达没有明显的变化，中、高剂量组ERβ表达显著增强，小剂量组TPH表达明显降低。与模型组相比，氟西汀和舒郁胶囊中剂量治疗组5-HTR2A和ERβ表达显著增强，大剂量组ERβ表达显著增强，小剂量组TPH表达显著降低。提示，白香丹胶囊中剂量组可明显提高5-HTR2A和ERβ蛋白表达，起到治疗作用。与正常组相比，PMDD肝气逆证模型组大鼠血清干预组5-HTR2A表达显著增强,TPH表达有增强趋势；空白给予白香丹胶囊小、大剂量组5-HTR2A和TPH表达显著降低，ERβ表达显著增强。与模型组相比，氟西汀和白香丹胶囊小剂量治疗组5-HTR2A 表达显著降低，白香丹中剂量组ERβ表达显著增强，大剂量组TPH表达显著降低。与正常组相比，PMDD肝气逆模型大鼠血清干预组5-HTR2A和TPH mRNA表达显著升高（P<0.01）,ERβ mRNA表达显著降低（P<0.001），白香丹胶囊小、中、大剂量空白给药组5-HTR2A和TPH mRNA表达均有明显增强，ERβmRNA表达显著降低。与模型组比较，氟西汀和白香丹小剂量组能显著降低5-HTR2A mRNA表达（P<0.001，P<0.05），白香丹中剂量组能显著升高ERβmRNA表达（P<0.001），氟西汀和白香丹小中大剂量组均能显著降低TPH mRNA表达（P<0.001，P<0.05，P<0.001）。与正常组相比，PMDD肝气逆模型大鼠血清干预组5-HT表达量显著降低（P<0.01）；与模型组比较，白香丹大剂量模型给药组5-HT表达量明显升高（P<0.01）。空白给药各剂量组与正常组比较5-HT表达量没有明显变化，但具有升高5-HT表达量的趋势。综上结果，PMDD肝气逆证模型血清中E2水平显著降低，导致血清干预组中B14细胞内ERβ表达显著下降，TPH表达显著增强，但是5-HTR2A免疫荧光表达和蛋白表达显示出不一致性，尚需进一步研究确认。同时白香丹胶囊具有升高大鼠血清中E2水平的作用，干预B14细胞后能够显著纠正5-HTR2A、ERβ和TPH以及神经递质5-HT的异常表达。 

  实验三：舒郁胶囊对PMDD肝气郁证模型大鼠血清干预RN16A-B14神经细胞5-HR2A、ERβ和TPH的影响。通过阴道涂片、旷场、强迫游泳筛选动物，选取合适大鼠72只，随机均分为9组：正常对照组、PMS肝气郁模型组、氟西汀阳性对照组、模型+舒郁给药组（小、中、大剂量组）、正常+舒郁给药组（小、中、大剂量组））。与正常组大鼠相比，模型组大鼠总路程显著减少（P<0.01），显示出较高水平的自主运动行为和高水平的探索活动；与模型组相比，用药干预后，各组大鼠总路程均有不同程度的显著增加（P<0.01或P<0.05）。与正常组相比，PMDD肝气郁模型大鼠血清干预组E2表达量显著降低（P<0.05）；与模型组比较，氟西汀和白香丹各剂量模型给药组E2表达量显著性升高（P<0.01）。空白给药各剂量组与正常组比较E2表达量没有明显变化。与正常组相比，PMDD肝气郁证模型组大鼠血清干预组5-HTR2A和ERβ表达显著降低,TPH表达显著增强；与模型组相比，氟西汀和舒郁胶囊小剂量治疗组5-HTR2A和ER-β表达显著增强，TPH表达显著降低，而空白给予舒郁胶囊小、中、大剂量组均未见显著性变化。与正常组相比，PMDD肝气郁证模型组大鼠血清干预组5-HTR2A和ERβ表达显著降低,TPH表达变化不显著；与模型组相比，氟西汀和舒郁胶囊小剂量治疗组5-HTR2A和ERβ表达显著增强，而空白给予舒郁胶囊小、中、大剂量组均未见显著性变化。与正常组相比，PMDD肝气郁模型大鼠血清干预组5-HTR2A和ERβmRNA表达显著降低（P<0.001）,TPH mRNA表达显著增强，舒郁胶囊小、中、大剂量正常给药组ERβmRNA表达均有明显增强（P<0.001），TPH mRNA表达显著降低（P<0.001），大剂量组5-HTR2AmRNA表达显著增强（P<0.001），说明舒郁胶囊本身具有升高5-HTR2A和ERβmRNA、降低TPHmRNA表达的作用。与模型组比较，舒郁胶囊小、中、大剂量模型给药组均能明显纠正5-HTR2A、ERβ和TPH mRNA异常表达的作用，其中小剂量给药组对于ERβ和TPH mRNA异常表达调整作用最佳，大剂量给药组对于5-HTR2AmRNA异常表达调整作用最佳。与正常组相比，PMDD肝气郁模型大鼠血清干预组5-HT表达量显著降低（P<0.05）。与模型组比较，舒郁胶囊小、中、大剂量模型给药组5-HT表达量均未见明显升高，但是有升高的趋势。空白给药组各剂量组与正常组比较也未见明显变化，但具有降低5-HT表达量的趋势，暗示：舒郁胶囊可平衡大鼠体内5-HT表达量的作用。综上结果，PMDD肝气郁证模型血清中E2水平显著降低，导致血清干预组中B14细胞内5-HTR2A和ERβ表达显著降低,TPH表达显著增强；舒郁胶囊具有升高大鼠血清中E2水平的作用，模型小剂量给药组血清干预B14细胞后能够显著纠正5-HTR2A、ERβ和TPH以及神经递质5-HT的异常表达。

  实验四 不同剂量雌激素诱导对RN16A-B14神经细胞5-HR2A、ERβ和TPH的影响。雌激素剂量达到100pg/ml时ERβ和TPH阳性细胞接近100%，荧光最强；雌激素剂量达到200pg/ml时5HTR2A 荧光最强。ERβ、5HTR2A和TPH的荧光表达均在达到最强表达后呈现衰减趋势。100pg/ml雌激素对RN46A-B14细胞表达ER-β和TPH影响最大，对于5HT2A表达量的影响，位于100-200pg/ml之间。当雌激素浓度小于该浓度时，随着E2浓度增加，各蛋白表达量上升，当E2浓度高于该浓度时，过量的E2使各蛋白的表达量开始下降。5HTR2A和ERβ的mRNA表达量，在40、100、200、400pg/ml雌激素诱导时，表达量先增加后减少，在100pg/ml时表达量最高。E2的剂量在40pg/ml以下时，5-HT的表达量没有明显的变化，当到E2的剂量上升到100pg/ml时，5-HT的表达量显著升高，之后其表达量呈下降趋势。E2的干预剂量达到100pg/ml时5HTR2A、ERβ和TPH及5-HT均有明显的升高或降低的转折，而上述PMDD肝气逆郁两证各组大鼠血清中E2含量均在100pg/ml左右，暗示PMDD肝气逆郁两证大鼠对B14细胞中上述指标的影响与血清中E2的干预剂量直接相关。结论：PMDD肝气逆郁两证的发病可能是因为体内E2不同程度的降低，引起ERβ表达降低，导致5-HT2AR的不同变化，引起5-HT浓度的降低，导致烦躁和抑郁情绪的出现。PMDD肝气逆郁两证对证方药白香丹胶囊和舒郁胶囊可能通过方药中白芍和香附中的白芍总苷和香附挥发油增加大鼠血清中的E2水平，从而激活 ERβ，而纠正5-HT2AR的异常变化，最终调整5-HT的水平，达到两药的治疗目的。本研究为乔明琦前期提出的“肝主疏泄与调节机体单胺类神经递质和激素有关”科学假说提供又一可靠证据。最后感谢情志病证创新团队、泰山学者乔明琦教授的指导，感谢各位参会专家，感谢团队的支持，感谢家人的理解。谢谢大家！

  苏国海教授：感谢王杰琼博士后的汇报，下面有请许晓芬做汇报。

  肝失疏泄病证患者眼神表情特征探索——抑郁症肝气郁证患者抑郁眼神识别研究——许晓芬

  许晓芬：各位专家、老师、同学们，大家上午好。我的毕业答辩题目是：肝失疏泄病证患者眼神表情特征探索——抑郁症肝气郁证患者抑郁眼神识别研究。

  将从以下6个方面进行介绍：研究背景、科学问题与研究假设、对象与方法、结果与讨论、结论与创新性、问题与展望。抑郁症的概况抑郁症是典型的情志病证；抑郁症全球发病率3.1%，我国5-6%；2020年发病率将升至疾病总类的第2位，仅次于缺血性心脏病；将会对全球近20%人群产生巨大影响；中国精神障碍和自杀所占总疾病的比例中抑郁症位列第一。综合以上可以看出抑郁症发病率高、危害大。

  目前抑郁症的评价主要是自评和他评，但是这种抑郁症评价标准却有以下弊端：主要适用于具有抑郁症状的成年人；对伴有严重迟缓症状的抑郁评定存在困难；对文化程度较低或智力水平稍差的人使用效果不佳。此外，汉密尔顿抑郁量表(Hamihon Rating Scale for DePression，HAMD)为目前世界上最常用的抑郁症状他评工具，是抑郁量表的“金”标准。但存在如下问题：在很大程度上依赖于临床精神检查的技巧及评定者的专业知识；如要获得可靠的结果，一定要经过恰当的培训；测评结果受测评人员的主观影响。寻求直接、真实、准确地测评抑郁情志的方法是医学、心理和神经科学家一直在探索的前沿领域，近年围绕该问题开展了如下研究：首先，智能测评系统开发；其次，生物标志物的寻找；再次，脑影像学依据探索。但研究尚存在精度欠缺，结果矛盾等诸多问题，亟待多学科交叉联合攻关进行深入研究。

  中医有关眼神的认识：认为情感表达中最显著、最难掩的是眼神。中医学理论认为：肝主疏泄，调畅情志，肝开窍于目；《通俗伤寒论》言“怒目而视者肝气盛”；《望诊遵经·变色望法相参》曰：“怒则肝气逆，故悻悻然目张毛起而面苍”。上述论述提示：眼神表情，是肝调畅情志的重要内涵，观察情志是否舒畅的重要窗口。中医学虽早已认识到眼神可表达内在情绪体验，但遗憾的是时至今日仍停留在中医学形成之初的主观描述阶段，尚未见严谨科研设计下的真正研究，但其对现代情绪测评研究仍具有重要借鉴意义。现代医学和心理学有关研究表明：眼动可以反应人的内在情感体验；眼动某些指标可作为精神分裂症的辅助诊断的工具；但有关抑郁症眼动的研究较少，并存在临床研究样本过少、数据单一、结果矛盾等不足。

  根据以上描述提出了两个科学问题：

  1.肝失疏泄、情志抑郁眼神表情内涵是什么？2.如何进行肝失疏泄、情志抑郁眼神表情研究？用什么方法研究？

  提出研究假设：

  1.推测以抑郁症肝气郁证作为研究切入点，运用眼动追踪系统精准记录眼动数据，综合计算机情感计算，开展抑郁证肝气郁证患者抑郁眼神识别研究。

  2.可能探索出抑郁症肝气郁证患者的眼动特征，尝试揭示肝失疏泄、情志抑郁眼神表情特征。

  3.可能探索出抑郁症眼动识别模型，从中寻求出肝失疏泄、情志抑郁眼神表情客观测评新方法，能为抑郁症的客观测评提供新途径。

  4.开展该研究将为抑郁情志的客观测评作出贡献，创新中医肝主疏泄调畅情志理论，跻身于现代医学、情绪心理学在该研究领域前沿，具有重要科学意义和社会意义。就这些假设，我们开展了以下研究：这是研究对象的纳入标准和排除标准，每组样本量是53。仪器设备：SMI公司iView XRED500眼动仪，其采样率达120Hz；采用瞳孔+角膜反射模式记录眼动数据；追踪水平位置±40°，垂直位置±60°，分辨率0.03°19英寸显示器，分辨率为1024×768；眼睛距离屏幕60cm；头动范围40×40cm；应用程序用VC＋＋。实验指标：平滑追踪眼动：RMSE、眨眼频率、眼跳频率、闭环追踪阶段；固视眼动：RMSE、眨眼频率、眼跳频率、注视频率、注视时间比、眼跳幅度。

  研究指标：RMSE：（均方根误差）是位置误差，计算被试者在实验过程中；眼睛扫视点与目标运动位置的累积位置误差；增益值：平滑追踪眼动，眼睛的速度与目标速度的比值；注视时间：任务的总时间-所有的眼跳时间；注视时间比：注视时间/每个任务的总时间。实验数据处理：计算机Matlab平台编写程序分离提取眼动指标；Excel 2013 进行数据整理，建立数据库；SPSS 22.0进行统计分析；统计方法采用重复测量方差分析；以P ＜ 0.05判断差异有统计学意义。讨论：平滑追踪实验和固视实验，病例组RMSE均大于正常组；病例组追踪“十”字目标时位置误差大，追踪运动的吻合程度差，平滑性差；有关研究证实，当追踪目标速度增大时，需要投入更多的注意来实现更加精准的追踪，目标速度增大实质上增大了追踪的难度；追踪目标速度较快时，病例组追踪的精准性更差，追踪的绩效更差，不能进行有效的追踪；追踪距离较长时，需要持续注意时间长，追踪绩效明显差于正常组，病例组存在持续注意缺陷；固视任务病例组注视的稳定性差。平滑追踪眼动和固视眼动实验，病例组均明显高于比正常组；研究抑郁症眨眼率为26次/分钟，正常人为15次/分钟；本研究平滑追踪眼动眨眼率为12～24次/分钟，正常人在6～9次/分钟；病例组追踪距离较长时，保持追踪注意能力低，眨眼频率明显高于正常组存在持续注意缺陷；研究认为消极的情感，如紧张、压力、疲劳等，会使眨眼频率增加；眨眼次数的增多是眼睛不敢正视，反应内心的异常的情感可以通过高频率的眨眼次数反映于外。平滑追踪眼动任务病例组的眼跳频率低于正常组；病例组追踪的平滑性差，速度增快时不能更好的产生追赶性眼跳；病例组无法赶上追踪目标，追踪“十”字目标时RMSE位置误差增大；固视实验眼跳频率无差异，固视实验主要是检测注视的持久和稳定性。短距离± 10°和速度30°/S时增益值更接近1，速度过慢和距离过长不易于追踪运动的平稳；正常组增益值维持在1左右，病例组的增益值显著大于正常组，大大偏离1，病例组的追踪运动不如正常组平稳。病例组注视时间比低、注视频率低、眼跳幅度大、病例组注视的稳定差、可能与存在大脑抑制能力的损伤，注意以及工作记忆力的损伤有关、有目标无分心物的固视任务一更容易保持注视注意、无目标固视任务三更容易引起注视注意的分散。综上得出：抑郁症肝气郁证眼动特征：平滑追踪眼动的均方根误差大、眨眼频率高，闭环追踪阶段和总体的眼跳频率低、增益值高，其追踪的平滑性差；固视眼动的均方根误差和眼跳幅度大、眨眼频率高、注视时间比和注视频率低、其注视的稳定性差。模型建立结果：敏感性: 实验诊断的真阳性率，结果92.31 %，漏诊的机会少。特异性: 诊断实验的真阴性率，结果85.19 %，发生误诊的机会少。阳性预测值: 预测阳性结果的正确率，医生最关心的诊断指标，结果85.71 %。阴性预测值:预测阴性结果的正确率，结果92.00 %，敏感性越高阴性预测值越高。阳性似然比: 真阳性率/假阳性率，数值越大确诊患病的可能性越大，结果6.2308。阴性似然比:假阴性率/真阴性率，阴性似然比数值越小，诊断的方法越好，结果0.0903。SVM模型对抑郁症肝气郁证患者的准确率88.68% ，国际通常为70-80%，本研究结果在国际上是比较高的。高准确率、高特异性、高敏感性、高阳性预测值、高阴性预测值、高阳性似然比以及低阴性似然比，该诊断效果好。根据抑郁症肝气郁证眼动数据实现抑郁检测，为抑郁情绪的客观评测提供了有效的、准确、客观的新方法。

  结论：1.探索出抑郁症肝气郁证的眼动特征，可以反应抑郁症肝气郁证的抑郁情感，同时揭示出抑郁眼神表情的眼动特征，丰富肝失疏泄情志抑郁眼神表情的内涵。2.建立的SVM模型，可以较为客观、准确地识别抑郁症肝气郁证患者，为抑郁情绪的客观评测提供新方法，同时探索出肝失疏泄情志抑郁眼神表情客观化研究的新方法。创新性：1.提出新见解：眼神表情，是肝调畅情志的重要内涵，观察情志是否舒畅的重要窗口，揭示新特征：揭示了抑郁眼神表情的眼动特征，丰富了肝失疏泄情志抑郁眼神表情的内涵，增添了肝主疏泄、调畅情志有关眼神表情的新内容，深化了肝主疏泄，调畅情志理论。2.建立新方法：建立SVM模型，为抑郁情绪的客观评测提供新途径，探索出肝失疏泄情志抑郁眼神表情客观化研究的新方法，为中医情志表情研究提供了具有借鉴意义的新途径。存在的问题：选取的山东省精神卫生中心的抑郁症住院患者，范围比较局限；选取了抑郁症的肝气郁证证候进行研究，研究内容设计比较单一；眼动跟脑区功能定位结合进行研究，深入研究抑郁症肝气郁证的发病机制；抑郁症严重程度与眼动识别的相关性；口服中药前后眼动的差异变化研究。就读期间发表的论文：工人、护士及大学生愤怒郁怒心理特征病例对照流行病学调查研究， 中华中医药杂志，2016年4期；抑郁症肝气郁证患者眼动研究探索，中华中医药学刊，2017年4期；The study of eye movement of depressive disorder, European Psychiatry,IF:4.129。就读期间参与的课题：国家自然科学基金，面上项目，抑郁症肝气郁证患者抑郁眼神，面部表情和姿态多模态识别及其脑区功能定位（81573829），参加；国家自然科学基金，青年基金项目，抑郁症肝气郁证抑郁眼神识别及其关键指标探索（81102738），参加；镇江市重点研发计划-社会发展，面上项目，抑郁症肝气郁证眼动识别研究（SH2015079），主持。

  最后，特别感谢我的导师--乔明琦教授，谢谢老师！献花，合影。

  大合影

  苏国海教授提问：王洁琼同学为肝疏泄失常提供了很好的研究结果，但是中医最大的特点应该是多靶点，不是着眼于一个系统，两个药物不同机制治疗，和激素能不能替代？第二个是许同学，做的也非常好。但是临床医生应用这项技术可能需要很长时间的培训；还想问一下不同的人群、性别、年龄、种族，抑郁症的眼动表现会不会不同？请二位作答。

  魏凤琴教授提问：王杰琼同学的汇报，实验一没有什么问题，实验二做的白香丹，实验三是舒玉胶囊，那么在目录里应该注明所用药物，这样整个框架就很醒目；并且要突出中医基础理论，目录里列了四个实验，但是没有写出中医基础理论的部分。第一部分应该是理论探讨，从中医的角度，把中医理论和雌激素做一个关联，否则就会误以为是中药学的博士后出站，第二部分实验，第三部分结论。许晓芬的论文，上次预答辩之后做了修改，肝和眼动的关系做了阐述。但是要写出眼动对中医的延伸，再要注意措辞，眼动实验仍然是司外揣内的一种方法，只是对以前不足的地方做了改进，并不是突破了司外揣内的方法。

  张惠云教授：王洁琼同学的实验我是知道的，其实雌激素的不稳定性对实验有很大的干扰，对两个亚型有什么影响，虽然也做了探讨，但是不够确切，具体是对哪个亚型的哪个症状的作用？许晓芬的工作量是很大的，我们现在的对抑郁症的评价主要是量表，那么我们做的眼动实验如何指导临床？

  鲁明源教授：首先是王杰琼的博士后汇报，好的实验应该做到深入浅出，研究的指标可以很多，但是指导临床的时候，应该做到比以前方便，简洁，有效。比如强迫游泳实验没有介绍它的数据表达的意义，为什么时间延长表示抑郁。研究本来是为了区分两个证型的区分度，但是最后没有区分，两个方剂都有共同的药物，混在一起介绍，违背了最初的课题设计。许晓芬的论文呢，经过预答辩做了修改，但是有疑问，就是你做了肝气逆，那么做肝气郁会不会有相同的结果？而且最终的创新点可以再提升一下，不要太注重法，要提升到道的层面。

薛红教授：杰琼的工作量是很大的，但是最后要跳出来，要与中医理论连接，与国际大数据的背景连接，结果需要发表，还有图表要改，很多柱形图现在已经不接受了。许同学技术是比较前沿的，但是样本量一个是小一点，而且没有提性别，年龄范围很宽，这是一个小的缺陷。结果方面，与精神分裂症等其他精神疾病也有相似之处，那么做其他的证型也可能会得到一样的结果，这可能不单单是抑郁症的表现。

王光彬教授提问：许同学病例组的病程和疾病程度是否进行了划分。年龄是18-65岁，但是性别、年龄有没有做统计学处理，应该各组所有的其他因素都做统计学分析，保证一致。

  王杰琼回答：缺少的中医理论后期补充、修改。根据老师们的意见后期我再修改，补充数据。

  许晓芬：老师们提到了性别、年龄、种族会不会有干扰，实验时，性别、年龄在分组时是一致的。现在的研究都是在同一个种族进行研究。临床应用的问题，主要是用于临床的评测，识别是否存在抑郁情绪，另外很多人有抑郁症而不自知，不去就医，这个操作比较简单，方便人们测评。病程没有统计差异，严重程度为中度抑郁症。对论文高度和理论不足的部分，我再进行修改。

宣读答辩结果：博士后王杰琼、博士许晓芬，同意通过论文答辩，同意王杰琼博士后出站，同意许晓芬博士毕业。

  肝疏泄失常相关脑区发病机制研究—四氢孕酮(ALLO)介导GABAAR 变化在PMDD肝气逆郁两证中的不同改变——高明周

  高明周：各位老师上午好，我的开题报告题目是：肝疏泄失常相关脑区发病机制研究—四氢孕酮(ALLO)介导GABAAR 变化在PMDD肝气逆郁两证中的不同改变。将从四个方面介绍。

  首先是选题依据：肝主疏泄，是指肝气具有疏通、畅达全身气机作用，包括促进精血津液的运行输布、脾胃之气的升降、胆汁的分泌排泄以及情志的舒畅等功能。肝疏泄太过调畅情志功能失常的发病机制：脑内γ-GABA、Glu含量升高，5-HT、NE、Ach、DA含量降低，进而影响前额叶皮质功能降低。但是脑内神经递质含量变化介导上述脑区功能及神经递质功能异常肝主疏泄”的更深层次内涵仍然不清晰。脑内皮层神经元细胞体汇集在一起形成微观尺度神经环路（micro-scale circuits），微观尺度神经环路互相连接形成节点，而节点组成复杂的宏观尺度脑网络（macro-scale networks）。脑内Glu能和GABA能神经元构成的兴奋与抑制平衡（excitation-inhibition balance，EIB）可以调节皮层内各个微观尺度神经环路间的同步性，而微观尺度神经环路间的同步性与宏观脑网络的功能连接密切相关。

  假设：PMDD肝气逆郁两证患者基因序列尤其是GABAA受体相关基因（如β2）单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs）通过调控GABAA受体β2亚基密度分布或结构，影响脑内GABA等相关机制进而表现出四氢孕酮个体敏感性差异。

  目的与意义：（1）发现PMDD肝气逆郁两证四氢孕酮(ALLO)介导GABAAR 变化关键发病机制。有望在“四氢孕酮 (ALLO)介导GABAAR变化与PMDD发病关键调控机制”科学问题上取得突破，以期在国际PMDD相关GABAA受体研究领域占有一席之地！有望揭示PMDD潜在的遗传学基础，从基因、脑和行为学水平攻克PMDD中枢发病机制这个科学难题！（2）创新肝主疏泄，调畅情志理论揭示肝疏泄太过、疏泄不及的微观机制，从“肝主疏泄调畅情志脑中枢调节”进一步精准定位到四氢孕酮 (ALLO)介导GABAAR分子机制，从而改变人们对“肝疏泄失常问题在肝”的表浅认识，深化“肝主疏泄调畅情志”理论内涵，拓展中医肝脏象理论内涵，最终促进中医藏象理论从现象到本质的现代化。

  实验一通过阴道电阻筛选动情周期规律大鼠；以动情周期依赖性居住入侵模型模拟PMDD肝气逆证；以强迫游泳模型模拟PMDD肝气郁证；行为测试遵循配对区组设计的随机顺序，以便保证每一个测试周期内各组动物数目大致相等。依据大鼠在间期1期的打斗得分，根据混合攻击行为得分和基线匀齐原则，将模型组大鼠分为PMDD肝气逆丹皮酚组（17.5mg/kg）、PMDD肝气逆药氟西汀组（2.7mg/kg-d）、PMDD肝气逆模型对照组及正常对照组（对照组均给予等量体积生理盐水）；PMDD肝气郁柴胡皂苷组（17.5mg/kg）、PMDD肝气郁药氟西汀组（2.7mg/kg-d）、PMDD肝气郁模型对照组及正常对照组（对照组均给予等量体积生理盐水）；每天8:30进行灌胃给药，给药三个动情周期。在动物分组前进行间期1期的居住入侵测试，并在每个动情周期的非接受期（NR期）进行行为学检测（打斗、旷场、高架），第三个周期行为学检测结束后取材。以射线自显迹法检测大鼠脑内GABAA受体情况，采用半定量RT-PCR基因扩增技术对正常组、PMDD肝气逆证模型组和丹皮酚给药组大鼠不同脑区中GABAA受体β2亚基mRNA表达变化进行检测；以放射免疫法检测血清中雌二醇（E2）、孕酮（P），泌乳素（PRL）含量；ELISA 观察孕酮及四氢孕酮变化；实验二Gabrb2 HT转基因雌性小鼠（C57BL / 6-129 / SvEv杂种）；经繁育产生WT，HT-P,HT-M和KO四种基因型，5-6周龄进行实验。实验三：临床招募志愿者，分组，进行全转录组基因测序、采血、临床表型收集、脑区扫描。可行性分析：1.前期国家自然科学基金等课题研究经前期综合征（重度，PMDD），探讨肝主疏泄调畅情志的作用机制”基础上的深入探索，已经将肝失疏泄定位到相关脑区，如发现额叶（尤其是后外侧前额叶皮质、眶额皮层）、右侧杏仁核、右侧海马、顶叶、双侧岛叶是 PMS 肝气逆证主要激活脑区；额叶、前扣带皮层是 PMS 肝气郁证主要激活脑区。2.依托于中医基础理论系国家级重点学科，情志病证临床研究中心，中医药经典理论实验室为省部共建教育部重点实验室，并引起香港科技大学薛红教授团队及贵州贵安医学精准医学研究院张耀洲教授团队提供基因测序支持，山东省医学影像研究所为长期合作单位。3.通过本人硕士阶段的影像学研究经历及香港科技大学生命科学部的研学培训，已具备相关工作能力，而且参与研究多项国家级研究课题，涉足临床流行病学调查，统计分析，数据处理等，自身能力和科研经验可对本研究的顺利进行提供保障。预期结果：发现敏感性关键机制；揭示基因-脑-行为学水平；发表1-2篇影响因子11分以上的SCI论文。

  张惠云教授建议：题目太大，不可能完成。针对一个问题，写一个完整的故事，从真实度和可塑性写完整。要做的这三点太大了。中医基础理论在描述上两个字代表了非常大的内涵。中基理论的每一句话不是一个实验能概括的了的。假说应该是语言非常精炼，从描述迈向阐述，现在机会非常好，可以在王老师这用影像，薛老师那做基因。

  鲁明源教授建议：肝主疏泄与脑的关系研究，这个关系还没研究，只能写前人的研究，而且特别大，光名医医案和报道就是很大一篇论文，第三个精神情感障碍才比较贴，理论研究特别宏阔，而实验演技较单一，会出现扣不上的情况，越明确越好，越能以小见大越好。揭示肝气逆肝气郁的实质，尽量回避这样的话，因为研究的目的是阐释经典

  中医最大的特点应该是多靶点，不是着眼于一个系统高明周干劲很足，有愿意干的精神，但是一定要专一一点，只有一年半的时间。再就小错误很多，抑制电位，不是动作电位，很多基础性的问题是不能犯得。要仔细一点。

  薛玲教授建议：研究内容还需要浓缩，要有舍。用药不能只设丹皮酚。

  王光彬教授建议：需要影像的话支持肯定会一如既往。建议是不要求大，要求深。沿着一条主线走下来，现在要做的东西太多了。第二个建议缩写要规范一下，大小写要一致，前后要一致。预期结果不要写那么大。

  乔明琦教授总结：对各位教授表示由衷的感谢，今天在这儿办出站、毕业、开题报告，对诸位都非常重要。我想对在座的诸位，尤其是我们团队的，要特别说明一点，尽管作为导师感觉到和老师的要求还有一定的差距，毕竟他们的研究比较深入，有可圈可点的地方，有明显的提高和进步，这也是各位带教精心的指导。高明周这样的开题，应该是这些年思路最清晰，把国内外的研究进展，扣着研究内容，分析到位。通过这样一次开题，除了找出不足以外，还要看到我们的进步。要扣着国内外的研究，扣着研究内容，做分析。通过我们的研究生，做一份有分量的研究，有好的研究思路。我的第一位博士后，自己全部做完了一项国家二类新药。要知道，读研就得激发潜力，要有热情，把活干出来。感谢各位专家和诸位来参加答辩，提出这些好的建议。由衷感谢。